1. PH sistèm tanpon se yon bagay ki enpòtan pou reyalize kondisyon pi bon kilti epi li anjeneral reyalize atravè youn nan sistèm tanpon sa yo:
1. Sistèm tanpon natirèl Nan yon sistèm tanpon natirèl, CO2 gaz balanse ak kontni CO3/HCO3 nan mwayen kilti a. Kilti ki gen sistèm tanpon natirèl yo bezwen kenbe nan yon atmosfè lè ki gen 5-10% CO2, anjeneral kenbe pa yon enkibatè CO2. Sistèm tanpon natirèl yo pri ki ba epi yo pa toksik.
2. HEPES HEPES gen ekselan kapasite tampon nan seri pH 7.2-7.4 epi li pa mande pou yon atmosfè kontwole. HEPES se relativman chè ak toksik nan kèk kalite selil nan pi gwo konsantrasyon. Sepandan, HEPES anpil ogmante sansiblite nan mwayen kilti a efè fototoksik nan ekspoze a fliyoresans.
3. Fenol wouj Pifò medya kilti komèsyal yo genyen fenol wouj kòm yon endikatè pH, ki pèmèt pH la rete konstan. Pandan kwasans selil yo, koulè mwayen kilti a chanje lè metabolit selil yo pibliye yo chanje. Nan nivo pH ki ba, fenol wouj vire mwayen kilti a jòn, pandan ke nan nivo pH ki pi wo, li vire mwayen kilti a koulè wouj violèt. Pou yon pH nan 7.4, mwayen kilti a se wouj klere, ki se pH la pi bon pou kilti selil. Sepandan, genyen kèk dezavantaj pou itilize phénol wouj: 1) Phenol wouj imite efè kèk òmòn esteroyid, espesyalman estwojèn. Se poutèt sa, li rekòmande yo sèvi ak mwayen san wouj fenol lè etidye selil ki sansib a estwojèn, tankou tisi tete. 2) Fenol wouj prezan nan kèk fòmilasyon san serom, ki ka entèfere ak balans sodyòm-potasyòm. Efè sa a ka netralize lè w gen ladan òmòn serom oswa pitwitè bovins nan mwayen kilti a. 3) Fenol wouj entèfere ak deteksyon nan etid sitometrik koule.
2. Sèl inòganik Sèl inòganik nan mwayen kilti a ede kenbe balans osmotik ak kontwole potansyèl manbràn lè yo bay iyon sodyòm, potasyòm ak kalsyòm.
3. Asid amine Asid amine yo se matyè premyè nan pwoteyin epi se poutèt sa yo se eleman esansyèl nan tout medya kilti selil li te ye. Asid amine esansyèl yo dwe enkli nan mwayen kilti a paske selil yo pa kapab fè sentèz yo poukont yo. Yo esansyèl pou pwopagasyon selilè ak konsantrasyon yo detèmine dansite selil maksimòm ki ka reyalize. Pami yo, youn esansyèl asid amine, L-glutamin, se patikilyèman enpòtan. L-glutamin bay nitwojèn pou NAD, NADPH ak nukleotid epi li sèvi kòm yon sous enèji segondè pou metabolis. L-glutamin se yon asid amine enstab ki, sou tan, konvèti nan yon fòm ki pa ka itilize pa selil yo epi yo ta dwe Se poutèt sa dwe ajoute nan mwayen kilti a anvan ou itilize. Lè yo ajoute L-glutamin ki depase kantite lajan ki nesesè nan fòmil medyòm kilti orijinal la, li ta dwe itilize ak prekosyon paske degradasyon li yo ka mennen nan akimilasyon amonyak, ki ka gen efè negatif sou kèk liy selil. Konsantrasyon L-glutamin nan medya kilti selil mamifè yo ka 0.68mM nan Mwayen 199 ak 4mM nan DMEM. Medya kilti selil envètebre ka genyen jiska 12.3mM L-glutamin. Sipleman tankou Glutamax yo pi estab epi yo ka ranplase glutamin pou kilti alontèm nan selil ralanti. Asid amine ki pa esansyèl yo ka ajoute tou nan mwayen kilti a pou ranplase asid amine ki apovri pandan kwasans lan. Lè yo ajoute asid amine ki pa esansyèl nan mwayen kilti a, kwasans selil yo ka ankouraje epi siviv selil yo ka pwolonje.
4. idrat kabòn idrat kabòn nan fòm sik se sous prensipal enèji. Pifò kilti kilti gen glikoz ak galaktoz, men gen kèk ladan yo tou maltoz ak fruktoz.
5. Pwoteyin ak peptides Pwoteyin ak peptides ki pi souvan itilize yo se albumin, transferrin, ak fibronectin. Yo patikilyèman enpòtan nan medya kilti san serom. Serom se yon sous rich nan pwoteyin, ki gen ladan albumin, transferrin, tripsin, albumin serom fetis bovin, ak fibronectin. Albumin se pwoteyin prensipal nan san epi li jwe yon wòl nan dlo obligatwa, sèl, asid gra gratis, òmòn, ak vitamin ak transpòte yo ant tisi ak selil yo. Kapasite nan obligatwa nan albumin fè li yon retire apwopriye nan sibstans ki sou toksik nan medya kilti selil. Trypsin se yon ajan pwoteksyon nan sistèm kilti selil, ki estab nan pH net ak asid, ak rezistan a tanperati ki wo ak degradasyon proteaz. Li se kapab anpeche plizyè serin proteaz, tankou tripsin. Albumin serik fetis bovin se yon glikoprotein nan serom fetis ak neonatal, ak konsantrasyon li pi wo pase sa ki nan serom granmoun. Li se tou yon inibitè nan serin proteaz. Fibronektin se yon faktè kle nan atachman selil. Transferrin se yon pwoteyin transpò fè ki bay fè nan manbràn selilè yo.
6. Asid gra ak lipid yo patikilyèman enpòtan nan medya kilti san serom paske yo anjeneral prezan nan serom.
7. Vitamin Anpil vitamin esansyèl pou kwasans selil ak pwopagasyon. Selil yo pa kapab fè sentèz vitamin nan kantite ase poukont yo, kidonk vitamin sa yo se sipleman enpòtan nan kilti tisi yo. Yon fwa ankò, serom se sous prensipal vitamin nan kilti selil, men medya kilti yo tou anrichi ak vitamin diferan pou fè yo apwopriye pou liy selil espesifik. Vitamin B yo pi souvan itilize pou ankouraje kwasans.
8. Eleman tras Nan medya ki pa gen serom, yo souvan ajoute tras eleman pou ranplase sa ki nòmalman nan serom. Eleman tras tankou kòb kwiv mete, zenk, Selenyòm, ak entèmedyè asid trikarboksilik yo se eleman chimik ki nesesè pou kwasans selil yo. Eleman tras sa yo esansyèl pou anpil pwosesis byolojik, pou egzanp, kenbe fonksyon anzim.
9. Sipleman medya Medya kilti yo itilize pou grandi kèk liy selil yo mande pou eleman adisyonèl ki pa enkli nan mwayen fondamantal la ak serom. Sipleman sa yo ede kenbe pwopagasyon selil yo epi kenbe metabolis selil nòmal. Malgre ke sipleman tankou òmòn, faktè kwasans, ak sibstans ki sou siyal yo nesesè pou kwasans nòmal nan kèk liy selil, li pi bon pou pran prekosyon sa yo: Piske adisyon a nan sipleman chanje presyon osmotik nan mwayen kwasans konplè a, ki ka gen yon enpak negatif sou kwasans selil yo, li pi bon yo tcheke presyon osmotik la apre yo fin ajoute sipleman. Pou pifò liy selil yo, osmolarite optimal la ta dwe ant 260 mOSM/kg ak 320 mOSM/kg. Lavi etajè mwayen an ap chanje apre adisyon sipleman. Mwayen konplè ki gen sipleman pwoteyin pral degrade pi vit pase mwayen fondamantal pou kont li.
10. Antibyotik Byenke se pa yon kondisyon pou kwasans selil, yo souvan itilize antibyotik pou kontwole kontaminasyon bakteri ak chanpiyon. Antibyotik yo pa rekòmande pou kilti selil paske yo ka maske kontaminasyon ak mycoplasma ak bakteri rezistan. Anplis de sa, antibyotik ka afekte metabolis selil sansib yo. Plasmocin ka elimine kontaminasyon mycoplasma e li te itilize pou kiltive liy selil gliom TS603, TS516, ak BT260. Anplis de sa, kilti selil prensipal yo ka kontamine tou pa fongis, pwotozoa, ak selil plant, ki se koze pa lame a oswa lòt kondisyon. Èbisid/glyphosate isopropylamine/(2-hydroxyethyl)aminometilfosfonik izopropilamin asid ka itilize kont selil plant yo; ampicillin B ak fluconazole ka itilize kont fongis; pentozolin oswa atovaquone ka itilize kont pwotozoa.
11. Serom nan mwayen kilti Serom se yon melanj konplèks ki gen albumin, faktè kwasans, ak inhibiteur kwasans. Serom se youn nan eleman ki pi enpòtan nan mwayen kilti selil yo epi li se yon sous asid amine, pwoteyin, vitamin (espesyalman vitamin idrosolubl tankou A, D, E, ak K), idrat kabòn, lipid, òmòn, faktè kwasans, mineral, ak eleman tras. Serom fetis ak ti towo bèf yo souvan itilize pou sipòte kwasans selil nan kilti. Serom fetis bovin se yon sous rich nan faktè kwasans epi li apwopriye pou klonaj selil ak kwasans selil nan kondisyon sevè. Sewòm ti towo bèf yo souvan itilize nan etid anpèchman kontak paske li gen yon pi ba efè pwomosyon kwasans. Medya kwasans òdinè yo anjeneral gen 2-10% serom. Anplis de sa nan serom nan mwayen kilti a gen fonksyon sa yo:
• Bay eleman nitritif debaz pou selil yo.
• Bay plizyè faktè kwasans ak òmòn ki ankouraje kwasans ak kontwole fonksyon selil yo.
• Bay plizyè pwoteyin lyan, tankou albumin ak transferin, ki ka transpòte lòt molekil nan selil la. Pa egzanp, albumin transpòte grès, vitamin, òmòn, elatriye nan selil la.
• Bay pwoteyin ki ankouraje atachman selil la nan matris la, tankou fibronectin.
• Bay faktè ekspansyon ki ede selil yo elaji anvan yo kòmanse divize.
• Bay inibitè proteaz pou pwoteje selil yo kont degradasyon proteaz yo.
• Bay mineral, tankou Na+, K+, Zn2+, Fe2+, elatriye.
• Ogmante viskozite nan mwayen kilti a, kidonk pwoteje selil yo kont domaj mekanik pandan kilti sispansyon brase.
• Aji kòm yon tanpon. Depi serom gen tou de faktè kwasans ak inhibiteur, wòl nan serom nan kilti selil yo trè konplèks. Sepandan, pandan ke li jwe divès fonksyon, serom gen kèk dezavantaj nan kilti tisi.